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基于核酸分子学方法hq环球体育app肉类成分鉴别技术研究进展

为保证食物成分hq环球体育app真实性,质检“十二五”规划纲要明确指出,需要点加强展开食物掺假辨别技能研讨。在肉类掺假方式层出不穷hq环球体育app形式下,对动物源性成分辨别技能hq环球体育app研讨逐渐成为食物安全领域hq环球体育app研讨热门。目前,运用hq环球体育app动物物种辨别剖析办法首要依据蛋白质和DNA剖析。


惯例PCR-凝胶电泳法

DNA片段经扩增后,经过琼脂糖凝胶电泳进行片段巨细hq环球体育app检测,这hq环球体育app依据核酸分子学肉类成分辨别办法中应用广泛且操作最简单hq环球体育app技能。其根本hq环球体育app实验思路为:依据不同物种细胞核或线粒体基因组序列中hq环球体育app特征位点规划物种特异性引物,使用PCR反响完成食物中方针基因片段hq环球体育app指数级扩增,继而经过电泳辨别食物中可能hq环球体育app物种来历。


多重PCR-凝胶电泳法:

多重PCRhq环球体育app规划多种一般PCRhq环球体育app引物,加入同一PCR反响系统里,同时扩增出多个核酸片段,以同时检测多种不同动物源成分hq环球体育app一项具有发展前景hq环球体育app技能。比较于单一物种hq环球体育appPCR系统,多重PCR技能具有节约本钱,提高剖析速率、功率和牢靠性hq环球体育app优点。


PCR-RAPD法和PCR-RFLP法:

PCR-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)法hq环球体育app将通用引物扩增后hq环球体育appPCR产品进行限制性内切酶酶切,然后经过凝胶电泳进行观察,作为单一物种hq环球体育app特有形式进行定性剖析,可进行亲缘性较近hq环球体育app物种间hq环球体育app辨别。

PCR-随机扩增多态性DNA(RAPD)使用任意PCR短hq环球体育app引物扩增产生一系列hq环球体育app产品,得到PCR产品hq环球体育app指纹图谱,依据指纹图间hq环球体育app不同区别不同hq环球体育app种属。当参考材料可用hq环球体育app很少或DNA序列信息未知时,RAPD技能hq环球体育app十分强壮hq环球体育app。但PCR-RAPDhq环球体育app重复性较差且受到食物中其他DNA成分hq环球体育app严峻搅扰,存在不易规范化与广泛应用hq环球体育app缺点。


DNA条形码:

DNA条形码技能开始用于生物分类和物种辨别,后发展到应用于动物肉类判定中并得到广泛研讨,hq环球体育app一种简单、快速、牢靠、有效hq环球体育app分子判定技能。大多数动物物种hq环球体育appDNA条形码hq环球体育app线粒体上一段约650 bp编码基因COI,研讨者将其作为动物判定hq环球体育app条形码规范片段。COI基因在双链环状闭合hq环球体育app核外线粒体基因组上,保证了其相对完整性和热稳定性,在深加工hq环球体育app肉类食物中有相对满足量hq环球体育appDNA被用于PCR扩增,保证满足高hq环球体育appPCR产品含量。COI序列还具有满足变异性、易扩增、片段自身在物种种内具有特异性和种间多样性等特点。


实时荧光定量PCR技能:

实时荧光定量PCR技能hq环球体育app使用荧光分子供给hq环球体育app荧光强度与PCR产品hq环球体育app丰度之间hq环球体育app相关性来完成实时数据收集。比较于在末期进行剖析hq环球体育app凝胶琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳技能,实时荧光定量PCR办法自然更加精确活络。在复杂hq环球体育app混合而成hq环球体育app产品中,即使只要微量hq环球体育app不同物种成分,也能剖析出来,因此被认为hq环球体育app在肉类判定中最有前途hq环球体育app分子东西之一。


ddPCR技能:

微滴数字(dd)PCR技能作为一种全新hq环球体育app精确定量核酸检测办法,经过把反响系统均分到大量反响单元中独登时进行PCR,并依据泊松散布和阳性比例来计算核酸数量。与传统PCR、定量PCR比较,其结果hq环球体育app精确度、精确性和活络度更佳。定量结果不再依赖于Ct值,直接给出靶序列hq环球体育app开始浓度,完成真正意义上hq环球体育app肯定定量。

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